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abcam抗體的修復(fù)和純化方法介紹
更新時(shí)間:2016-12-09   點(diǎn)擊次數(shù):2791次
   abcam抗體的修復(fù)方法

  1、沸水浴修復(fù),將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境,保持外部沸騰狀態(tài)15min,自然冷卻至室溫;

  2、微波修復(fù),將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于微波爐中,高火5min,?;?min,中火5min,自然冷卻至室溫。

  abcam抗體的純化方法

  多克隆抗血清或單克隆腹水/組織培養(yǎng)上清通常通過下述三種方法中的一種來進(jìn)行純化:

  1.蛋白 A/G 純化

  蛋白 A/G 純化是應(yīng)用金黃色葡萄球菌的蛋白 A 或鏈球菌的蛋白 G 對(duì)免疫球蛋白 Fc 段的高親和性。蛋白 A/G 純化從粗制抗血清中去除了血清蛋白,但沒有去除非特異的免疫球蛋白組分。結(jié)果蛋白 A/G 純化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反應(yīng)性。

  2.親和純化

  親和純化是通過相似性分離某一特定蛋白或具有相似特征的一組蛋白。這種分離蛋白的技術(shù)是基于在蛋白和耦合于層析介質(zhì)上的特定配基之間的一種可逆的相互作用。

  抗原親和純化是利用免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生的抗原進(jìn)行結(jié)合的特點(diǎn),消除了大量的非特異免疫球蛋白成分,把與目標(biāo)抗原特異結(jié)合的免疫求蛋白富集。因此親和純化后獲得的主要是含目標(biāo)特異性免疫球蛋白。

  3.前吸收

  多克隆抗體有時(shí)要經(jīng)過前吸收。也就是說它們要被不同物種來源的其它蛋白或血清吸收,以消除可能的交叉反應(yīng)的抗體。這樣純化后的抗體純度和特異性都很高,任何交叉反應(yīng)都被顯著減少。

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