生化試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一，但不能反映試劑質(zhì)量的全部。試劑成份、純度、用量及穩(wěn)定性，才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。目前市售的一些試劑具有抗干擾作用，主要是通過(guò)加入抗干擾物質(zhì)或使用新的色素原以避免內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。但值得注意的是：一些試驗(yàn)項(xiàng)目在消除內(nèi)源性物質(zhì)干擾的同時(shí)，會(huì)帶來(lái)樣品含量真實(shí)性的變化。
一、試劑空白
生化試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測(cè)試劑會(huì)因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測(cè)試劑會(huì)因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負(fù)反應(yīng)，在放置過(guò)程中其試劑空白吸光度會(huì)因NADH自行氧化為NAD+而下降。
原則上，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好，不能超過(guò)一個(gè)高限;相反，吸光度下降的反應(yīng)，其試劑空白吸光度不能低于一個(gè)低限。因此，生化試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器，如經(jīng)核查超限，儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警，提示更換試劑。需要指出的是，還原型輔酶I(或II)等投料量不足或劣質(zhì)的原料，往往需要加大用量，才使“表觀”吸光度上升，湊合過(guò)試劑空白核對(duì)的“關(guān)”，其后果為如下情況：
a.線性范圍變窄?，F(xiàn)象：高值測(cè)不高。原因：生產(chǎn)試劑時(shí)有效成分投料量不足;試劑成份穩(wěn)定性較差。
b.靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降，測(cè)定結(jié)果有嚴(yán)重系統(tǒng)誤差。原因：試劑底物濃度不足。
c.低值偏高現(xiàn)象：生化試劑空白的變化曲線(吸光度VS時(shí)間)明顯波動(dòng)。原因：試劑自身不穩(wěn)定，自行分解;工具酶純度不夠，雜酶含量超限，導(dǎo)致干擾作用。
二、樣品信息
樣品的溶血、脂血、黃疸等會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。因此，應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，采用雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)的檢測(cè)模式，并在結(jié)果計(jì)算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響，減少干擾程度。
三、測(cè)定范圍
每種待測(cè)物都有一個(gè)可測(cè)定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過(guò)此范圍，分析儀將顯示結(jié)果超過(guò)范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質(zhì)，應(yīng)更換合格生化試劑。
四、酶的預(yù)活化
測(cè)定血清中的某些酶，如CK，離體(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過(guò)適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新激活。
五、底物耗盡
使用連續(xù)監(jiān)測(cè)法、兩點(diǎn)法測(cè)定酶活性時(shí)，若酶活性非常高，底物接近被耗盡，吸光度上升或下降會(huì)超過(guò)某一吸光度變化范圍，監(jiān)測(cè)期的吸光度將偏離線性，使測(cè)定結(jié)果不可靠。
六、校準(zhǔn)與結(jié)果溯源性
酶的校正：要滿足在同一方法學(xué)、同一測(cè)定條件、與理論計(jì)算的FACTOR值差異不大，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進(jìn)行校正。
檢驗(yàn)結(jié)果溯源性，得建立一個(gè)可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到常規(guī)方法測(cè)定中去，使常規(guī)方法測(cè)定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來(lái)。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過(guò)程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)方法為驗(yàn)證手段。方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)常采用回歸方程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，假如斜率接近1，截距較小，這意味著實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法對(duì)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果和溯源目標(biāo)參考系統(tǒng)對(duì)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果非常接近。
校準(zhǔn)液標(biāo)示值往往是按其基質(zhì)偏差修正的，所以標(biāo)示值并非實(shí)際值。校準(zhǔn)液、質(zhì)控血清通常是經(jīng)過(guò)處理的混合人或動(dòng)物血清，這種制備物在特定分析系統(tǒng)中往往與人新鮮血清反應(yīng)性不同而產(chǎn)生基質(zhì)偏差。如總膽固醇測(cè)定基質(zhì)效應(yīng)研究指出：校準(zhǔn)液酶法測(cè)定回收結(jié)果偏低可達(dá)5%~7%。
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